Table 1 Decarboxylation kinetics of branched-chain, aromatic, sulphur-containing and linear 2-oxo acids by cell extracts of S. cerevisiae strains expressing single 2-oxo acid decarboxylase genes
Substrate | Strain | K m (mM) | V max (U mg protein−1) | Hill coefficient (n) | V max/K m (U mg protein−1 mM−1) |
|---|---|---|---|---|---|
Pyruvate | IME259 (control) | BD | BD | NA | NA |
IME260 (ARO10↑) | BD | BD | NA | NA | |
IME261 (kdcA↑) | 33.0 ± 3.61 | 0.03 ± 0.00 | 1.2 ± 0.4 | 0.00091 | |
IME262 (kivD↑) | BD | BD | NA | NA | |
Phenylpyruvate | IME259 (control) | BD | BD | NA | NA |
IME260 (ARO10↑) | BD | BD | NA | NA | |
IME261 (kdcA↑) | 0.20 ± 0.04 | 0.12 ± 0.01 | 1.0 ± 0.1 | 0.60 | |
IME262 (kivD↑) | BD | BD | NA | NA | |
α-ketoisovalerate | IME259 (control) | BD | BD | NA | NA |
IME260 (ARO10↑) | BD | BD | NA | NA | |
IME261 (kdcA↑) | 8.31 ± 1.34 | 2.34 ± 0.25 | 0.9 ± 0.1 | 0.28 | |
IME262 (kivD↑) | 7.73 ± 1.62a | 0.03 ± 0.00a | 2.7 | 0.0039 | |
α-ketomethylvalerate | IME259 (control) | BD | BD | NA | NA |
IME260 (ARO10↑) | BD | BD | NA | NA | |
IME261 (kdcA↑) | 3.49 ± 0.34 | 0.69 ± 0.07 | 0.8 ± 0.1 | 0.20 | |
IME262 (kivD↑) | 12.9 ± 2.87 | 0.05 ± 0.01 | 1.0 | 0.0039 | |
α-ketoisocaproate | IME259 (control) | BD | BD | NA | NA |
IME260 (ARO10↑) | BD | BD | NA | NA | |
IME261 (kdcA↑) | 0.57 ± 0.09 | 0.49 ± 0.00 | 1.0 | 0.86 | |
IME262 (kivD↑) | 2.42 ± 0.90 | 0.04 ± 0.01 | 1.2 | 0.017 | |
4-methylthio-2-oxobutanoate | IME259 (control) | BD | BD | NA | NA |
IME260 (ARO10↑) | BD | BD | NA | NA | |
IME261 (kdcA↑) | 1.43 ± 0.22 | 0.13 ± 0.00 | 1.1 | 0.091 | |
IME262 (kivD↑) | BD | 0.01 ± 0.00b | NA | NA | |
2-oxobutanoate | IME259 (control) | BD | BD | NA | NA |
IME260 (ARO10↑) | BD | BD | NA | NA | |
IME261 (kdcA↑) | 5.58 ± 0.58 | 0.10 ± 0.01 | 1.1 | 0.018 | |
IME262 (kivD↑) | BD | BD | NA | NA | |
2-oxopentanoate | IME259 (control) | BD | BD | NA | NA |
IME260 (ARO10↑) | BD | BD | NA | NA | |
IME261 (kdcA↑) | 1.44 ± 0.28 | 0.17 ± 0.00 | 1.1 | 0.12 | |
IME262 (kivD↑) | BD | BD | NA | NA |